診斷要點為：持續劇烈咳嗽，X線所見遠較體征為顯著。如在年長兒中同時發生數例，可疑為流行病例，可早期確診。白細胞數大多正常或稍增高，血沉多增快，Coombs試驗陽性。青、鏈霉素及磺胺藥無效。血清凝集素(屬IgM型)大多滴度上升至1︰32或更高，陽性率50%～75%，病情愈重陽性率愈高。冷凝集素大多于起病后第1周末開始出現，至第3～4周達高峰，以后降低，2～4月時消失。

此為非特異性反應，也可見于肝病、溶血性貧血、傳染性單核細胞增多癥等，但其滴度一般不超過1︰32。而腺病毒所致年長兒肺炎，冷凝集素多為陰性。血清特異性抗體測定有診斷價值，臨床常采用者有補體結合試驗，間接血凝試驗，間接免疫熒光法及 聯免疫吸附試驗等。

此外又可用 聯吸附試驗檢測抗原。近年有用肺炎支原體膜蛋白制成的單克隆抗體檢測標本中抗原體膜蛋白制成的單克隆抗體檢測標本中抗原的報道。近年國內外應用DNA探針及PCR檢測肺炎支原體DNA診斷有快速特異性高優點。用病人痰液或咽拭洗液培養支原體需時太久，常要2～3周，因此對臨床幫助不大。

【鑒別診斷】

本病有時須與下列各病鑒別：肺結核﹔細菌性肺炎﹔百日咳﹔傷寒﹔傳染性單核細胞增多癥﹔風濕性肺炎。均可根據病史、結核菌素試驗、X線隨訪觀察及細菌學檢查和血清學反應等而予以鑒別。