根據病史、臨床典型表現可作出臨床診斷，加下列實驗室檢查中的1項即可確診。

(一)細胞學檢查

以玻片在皰疹底部作印片，Wright-Giemsa染色，顯微鏡下見到具有特征性的多核巨細胞或核內嗜酸陛包涵體，此法敏感性低。

(二)病毒抗原檢測

從皮損處取標本，以單克隆抗體直接免疫熒光試驗或酶聯免疫吸附試驗檢測HSV抗原，是臨床常用的快速診斷方法。

(三)病毒培養

取皮損處標本進行病毒培養、分離、鑒定、分型，是診斷HSV感染的“金標準”，但操作復雜，花費大。

(四)核酸檢測

已有報道應用核酸雜交技術及PCR技術診斷生殖器皰疹，可提高診斷的敏感性并可進行分型。

(五)HSV抗體檢測

采用蛋白印記試驗和部分ELISA試驗測定血清型特異性抗體。HSV-1及HSV-2型特異性血清抗體檢測尤其是IgM檢測是發現亞臨床或無癥狀感染最可行的手段。